真武汤配方颗粒化学成分研究
真武汤出自《伤寒论》，药物组成为：茯苓三钱9g芍药三钱9g白术二钱6g生姜三钱9g附子炮去皮
，一枚，破八片9g。具有温阳利水的功效，主治脾肾阳虚，水气内停证。小便不利，四肢沉重疼痛，
腹痛下利，或肢体浮肿，苔白不渴，脉沉；太阳病发汗过多，阳虚水泛。汗出不解，其人仍发热，
心下悸，头眩，身瞤动，振振欲擗地。过量服用会有毒性反应，临床中偶有口干、便结，孕妇忌服。
本次实验以高效液相色谱法，对真武汤配方颗粒中的有效成分进行定性然后定量。本实验旨在为
真武汤配方颗粒的质量标准建立提供参考。
 
1. 材料
1.1仪器+辅助工具
    waters 2695型HPLC仪，包括2966二极管阵列检测器、Empower3色谱工作站；赛多利斯万分之
一天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；0.45μm滤头，注射器（匹配0.45μm滤头），500ml烧杯，
玻璃搅拌棒，容量瓶。
1.2药品与试剂
    对照品：5-羟甲基糠醛，没食子酸，芍药内酯苷，芍药苷，苯甲酸，苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰
乌头原碱，6-姜酚，白术内酯III，均购买于成都埃法生物科技有限公司，采用面积归一化法检测纯
度均大于98％。乙腈为色谱纯，三乙胺，磷酸，均为分析纯，水为怡宝纯净水（4.5L）。
 1.3原料
一方制药-中药配方颗粒一剂包括：生姜3包（0.5g/包），茯苓1包（0.5g/包），麸炒白术1包
（3.0g/包），白芍1包（1.0g/包），淡附片配方颗粒（0.7g/包）。（相当于临床使用药材生姜9g，
茯苓10g，麸炒白术10g，白芍10g，淡附片6g）
 
2. 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：月旭C18色谱柱 4.5mm*250mm*5μm；流动相：A：乙腈，B：0.1%磷酸水+0.1%三乙胺水，
（梯度洗脱：0-5min，A：5%，5-25min，A：5%-17%，25-70min，A：17%-65%，70-75min，
A：65%，75-76min，A：65%-90%，76-90min，A：90%，90-92min，A：90%-5%，92-100min，A：5%）。
检测波长（定量用波长）：5-羟甲基糠醛，没食子酸，6-姜酚均用280nm；芍药苷，芍药内酯苷，苯甲酸，
苯甲酰新乌头碱，苯甲酰乌头原碱，均用230nm；白术内酯III用222nm。柱温：35℃，流速：1.0mlmin。
 
2.2真武汤的制备
  取真武汤配方颗粒一剂，500ml烧杯一个，将一剂药中每个小袋撕开倒入烧杯中，先加50ml沸水湿润，
再加200ml沸水搅拌使颗粒溶化，放冷，过00.45μm针头滤器，即得。
 
 2.3溶液配制
分别取，对照品没食子酸，5-羟甲基糠醛，芍药内酯苷，芍药苷，苯甲酸，苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，
6-姜酚，白术内酯III（均购买于成都埃法生物），配制成浓度分别为0.14μg/μl， 0.044μg/μl， 0.056μg/μl
，0.164μg/μl，0.032μg/μl，0.012μg/μl， 0.002μg/μl，0.036μg/μl，0.00096μg/μl的混合对照液。
 
2.4系统适用性试验
精密量取“2.3”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，
记录色谱图。由图1可知，在该色谱条件下， 各成分均能达到基线分离。


标记时间的峰依次分别为：没食子酸，5-羟甲基糠醛，芍药内酯苷，芍药苷，苯甲酸，苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，6-姜酚，
白术内酯III）
2.5标准曲线绘制
 
没食子酸：Y=446763x-77438   （R=1，n=5）
5-羟甲基糠醛：Y=291453x-64474  （R=1，n=5）
 
芍药内酯苷：Y=82741x-12477  （R=0.9997，n=5）
 
芍药苷：Y=306544x-474523  （R=0.999，n=5）
 
苯甲酸：Y=230965x-83997  （R=1，n=5）
 
苯甲酰新乌头原碱：Y=35628x-493.81（R=0.9998，n=5）
 
苯甲酰乌头原碱：Y=4611.4x+1409  （R=0.999，n=5）
 
6-姜酚：Y=24491x-5201.6 （R=0.9999，n=5）
 
白术内酯III :Y=2148x+2907.1 （R=0.9994，n=5）
2.6重复性试验
9种物质保留时间RSD， n=5，
没食子酸RSD=1.84%，5-羟甲基糠醛RSD=1.40%，芍药内酯苷RSD=0.36%，芍药苷RSD=0.29%，苯甲酸RSD=0.22%，
苯甲酰新乌头原碱RSD=0.09%，苯甲酰乌头原碱RSD=0.09%，6-姜酚RSD=0.07%，白术内酯IIIRSD=0.05%，表明仪器重现性良好。
2.7样品含量计算

	标准方程	相关度	真武汤进样 100μl 峰面积	计算X（体积 μL）	进样浓度（μg/μl）	进样质量μg	含量 μg/ml
没食子酸	Y=446763x-77438	1	14353017	32.3	0.14	4.522	45.22
5-羟甲基糠醛	Y=291453x-64474	1	4827751	16.79	0.044	0.739	7.39
芍药内酯苷	Y=82741x-12477	0.9997	9925475	120.11	0.056	6.726	67.26
芍药苷	Y=306544x-474523	0.999	31523969	104.38	0.164	17.118	171.18
苯甲酸	Y=230965x-83997	1	6243645	27.4	0.032	0.877	8.77
苯甲酰新乌头原碱230	Y=35628x-493.81	0.9998	969149	26.47	0.012	0.318	3.18
苯甲酰乌头原碱  230	Y=4611.4x+1409	0.999	704830	152.54	0.002	0.305	3.05
6-姜酚	Y=24491x-5201.6	0.9999	88901	3.84	0.036	0.138	1.38
白术内酯III	Y=2148x+2907.1	0.9994	88769	39.97	0.00096	0.038	0.38

3讨论
有研究认为，同时测定中药复方中多个成分时，因 各成分的紫外最大吸收波长不同，因此需要采用波长切
换法测定各成分的含量。参考文献在 190～400 nm 波长范围内对 9 种待测成分进行全波长扫描，结果发现，
在233 nm波长处芍药苷，芍药内酯苷，苯甲酸，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰新乌头原碱，有较大吸收，
222 nm波长处白术内酯III有最大吸收，280nm波长处5- 羟甲基糠醛，，有最大吸收，205nm，
272nm处没食子酸有最大吸收，200nm，281nm处6-姜酚有最大吸收，考虑到部分成分含量较低，
因此在保证各待测成分检测灵敏度及基线分离的情况下，本研究采用“2.1”项下波长作为检测波长。
综上所述，本研究所建定性（保留时间+紫外光谱比对）定量方法准确、专属性好，可用于同时测定
真武汤中9种活性成分的含量。
附 标准曲线图+紫外光谱图